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　　关于免疫印迹的结果兼答细胞网友

　　作者：分子

　　尊敬的方博士:

　　非常崇敬您的科学打假义举。从99年未出国起就开始看您的网站。最近一段
时间，关于司教授和魏院士的事件一直在观望。看到大家对免疫印迹的结果讨论，
感觉有话要说，希望能够给予登载! 谢谢! 

　　在魏院士的NM2000文章中，图7a显示的是用内皮细胞接种过的鼠血清对抗原
(HUVE，SVEC4-10)和阴性对照(Meth10)产生的免疫印迹；图7b显示的是正常(未
接种过的)鼠血清对抗原(HUVE，SVEC4-10)和阴性对照(Meth10)产生的免疫印迹。
由于图7b基本没有任何条带显示，而图7a除阴性对照的泳道，和图7b的相应两个
泳道都显示了非常特异的5-6个条带。据此该文认为试验直观地显示内皮细胞接
种鼠的特异性。

　　在司教授提供的免疫印迹结果中，左边条带为分子量标准，中间条带为用内
皮细胞接种过的鼠血清对抗原(脐带静脉内皮细胞)产生的免疫印迹，右边条带为
正常(未接种过的)鼠血清对抗原(脐带静脉内皮细胞)产生的免疫印迹。大家可以
清楚地看到，右边条带和中间条带几乎没有什么本质的区别。除了个别微弱的条
带有细微的差别外，主要的特征性条带可以说是完全一致的。据此，司教授可以
认为内皮细胞免疫鼠与正常鼠不存在显著区别，也就是说内皮细胞接种鼠没有显
著特异性。这和魏院士文章完全相悖。

　　关于免疫印迹试验中的可控因素， 兼答细胞网友:

　　细胞网友: "…..免疫过程中和实验过程中的材料，系统差异和动物的个体
差异是存在的，这多多少少会影响最终的实验结果，看不出司履生教授想用这个
免疫印迹图片说明什么问题。是想说明你的带多，是真实的，反之，就不真实？
如果魏于全把他的W/B显影时间长一点，显示的带多一点，或者换一只小鼠的免
疫球蛋白（这不是什么难事吧？），多显示几条带，你是不是就认为他没有作假
了呢？司履生教授的W/B最多只能说明，他的免疫血清含有抗脐带静脉内皮细胞
多种蛋白的抗体。而不能证明魏于全的W/B不是真实的。 …..W/B显带的多少和
细胞蛋白加样量，使用免疫球蛋白量，以及多种因素有关。司履生教授做的W/B
如果用少一点细胞蛋白，进一步稀释血清，他也会得到一张只显示四，五条带的
免疫印迹图片，不信试试。….."

　　由于免疫印迹试验步骤较多，可控因素的确很多，然而，万变不离其综，最
强的条带总会最先显现，最弱的条带往往最后出现。如果有意降低灵敏度，比如
缩短显影时间，稀释第二抗体等，始终会首先看到特征性的强反应条带。如果那
样的话，司教授的中间条带和右边条带会变得完全一样。那样的话，更能证明魏
院士的NM文章图7a与7b与别人重复试验结果完全相悖。

　　细胞网友:  "…….. 免疫血清和免疫球蛋白的结果应该一样吗？免疫球蛋
白在纯化过程中由于丢失而在W/B中少几条带不正常吗？何况如果从司履生教授
的免疫血清中提取免疫球蛋白做Western Blotting， 有没有可能获得和魏于全
相似的结果呢？…."

　　大家都知道免疫血清中的主要成分就是免疫球蛋白，即使从免疫血清中提取
免疫球蛋白做试验，同样不可能得到图7a和7b完全不同的结果。大家请注意，司
教授怀疑免疫印迹条带太少是一方面，最根本的一条其实为: 所谓的内皮细胞免
疫能否有特异的免疫应答。他用自己的重复试验验证了对魏院士文章的怀疑。

　　此外， 关于如何确认220和130的条带是否为VEGFRII 和alpha V integrin: 

　　细胞网友: "您不认为这个图7（A，B）Western Blotting (W/B)在整个论 
文中，仅仅起一个提示或者推测的作用吗？它仅仅表明多_免疫的小鼠免疫球蛋
白能够和220KD 和 130KD的两个蛋白在Wsetern Blotting 实验中反应。至于这
两条带是不是200KD 的VEGFRII或是130KD的alphaV integrin，以及起免疫治疗
作用的免疫球蛋白是不是抗VEGFRII，或抗alphaV integrin 免疫球蛋白，这个
W/B 没有,也不可能给出明确的答案。…"

　　如果有确实的免疫印迹结果，每一个条带上的蛋白质足够可以用来做质谱分
析了。根据质谱的结果，当然可以分析220和130的条带是否为VEGFRII 和alphaV 
integrin。这样的实验并不费事，按照魏院士实验室的条件完全可以做到。

　　其他问题不攻自破!

　　题外话: 本人从不认识司教授或魏院士，关于此次事件所有信息全部来自新
语丝网站。本人对发表的言论负全部责任! 若干年以前，本人在国内学习工作时
就做过各种各样的免疫印迹，到美国以来，也进过好几个实验室。漂亮的原始免
疫印迹图是所有人追求的目标。往往漂亮的免疫印迹图就能发好的文章或申请到
好的基金。可是，谁都知道，再漂亮的图也必须是实实在在能重复，能经得住推
敲的。一旦文章发表，作者要为自己的声誉复全部责任的。一旦有人质疑，就已
经是很丢人的事了。哪里容得你自我狡辩。   本人一直从事第一线的科研工作，
对于方博士的科学打假始终钦佩有加。关于魏院士对于新语丝网站的看法 ："…
我不想说，还需要我来说吗？真正的科学家都知道是怎么回事。" 本人持坚决反
对的立场。

(XYS20060423)

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